汞红溶液作用是什么?
1. 试剂名称、分子式和组成 汞红,也称为四甲基汞苯胺蓝,是荧光染料。它是由甲胺与汞化合成含汞的衍生物,再通过重氮化反应和偶合反应制成的。化学名称: 四甲基汞苯胺蓝;CAS号:[8092-82-6];分子量(Mw):566.73;色相或颜色:亮黄色晶体粉末;结晶水含量(H2O):含有1个结晶水Rf值:0.40-0.65 (氯仿);溶解性:几乎不溶于乙醚、丙酮、苯及二硫化碳等有机溶剂中,可溶于浓盐酸,微溶乙醇和水。
2.理化性质 汞红是一种蓝色荧光染料,在紫外光(λ > 385nm)的激发下,能发出强烈的蓝色荧光。其染色原理如下:首先,汞离子被染液中的无色分子吸附后,经过一系列化学反应,使染色剂带上负电荷,从而形成带电离子型染料;接着,带有负电荷的染色剂通过向细胞膜的穿透能力而进入细胞内;最后,带负电的染料在细胞里通过质膜或者通过细胞内的其他途径移到含线粒体的细胞器上,进而激活单链核糖核酸酶,导致cAMP浓度升高,促使蛋白质的合成。在细胞核里也可以观察到蓝色的颗粒,即蛋白的合成部位。 用紫外分光光度计测定染色的细胞,在385nm波长处有最强的吸收峰,据此可以确定染色效果。如果直接使用纯的汞红染色剂来染色细胞,由于它的着色力很差,需要很高的染色时间和浓度才能把细胞充分染色,因此往往需要在染色剂中加入少量的碱性物质(如氢氧化钠),这样既可减少染色时间又可使细胞着上一浅蓝色的泽。当加入的碱性物质过多时,细胞不是呈浅蓝色,而是灰黑色。这种现象叫反染现象。 产生反染现象的原因是过多的碱性物质携带的负电荷将正在带电的染色剂所带的负电荷中和掉,从而使染色剂不能进细胞内发挥作用。
过高的pH值也会使染色剂分解而产生反染效应,所以应控制染色液的pH值为9。温度过高也会导致染色剂的降解而发生反染现象。染色过程中要注意保持温度适宜。